05-26-2016, 03:01 PM
การผลิตแอนติซีรัมของเชื้อไวรัส Potato virus A
สิทธิศักดิ์ แสไพศาล, ชลธิชา รักใคร่ และศรีเมฆ ชาวโพงพาง
กลุ่มวิจัยโรคพืช สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช และมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตบางเขน
สิทธิศักดิ์ แสไพศาล, ชลธิชา รักใคร่ และศรีเมฆ ชาวโพงพาง
กลุ่มวิจัยโรคพืช สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช และมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตบางเขน
การผลิตแอนติซีรัมของเชื้อไวรัส potato virus A (PVA) ทำการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในส่วน coat protein gene (CP) ของ Potato virus A ขนาด 789 คู่เบส (bp) และต่อเชื่อม (ligation) PCR product เข้าสู่พลาสมิดพาหะ (plasmid vector) โดยนำดีเอ็นเอสังเคราะห์ผสมกับเวคเตอร์ pET 101/D-TOPO® (Invitrogen) และทำการคัดเลือกเฉพาะโคลนที่มีชิ้นดีเอ็นเอส่วนของ CP gene ที่ใส่เข้าไปใน vector นำมาทำให้บริสุทธิ์โดยวิธี miniprep และส่งไปตรวจสอบหาลำดับเบสพบว่า มีลำดับนิวคลีโอไทด์ 789 bp หลังจากนั้น subclone ยีนโปรตีนห่อหุ้มอนุภาคของไวรัส PVA-CP เข้าสู่ protein expression vector (pET 200/D-TOPO) และ transform เข้า E. coli Top 10 และขณะนี้กำลังดำเนินการคัดเลือกโคลนที่สามารถสังเคราะห์โปรตีนได้ในเซลล์ของ E. coli BL21 ในอาหาร 2XYT ที่เติมสารปฏิชีวนะ ampicillin 100 มิลลิกรัม/ลิตร และชักนำให้เกิดการสังเคราะห์โปรตีนด้วย Isopropyl-β-D thiogalactopyranoside (IPTG)