การพัฒนาชุดตรวจสอบแบบ Lateral flow test strip เพื่อตรวจสอบแบคทีเรีย Burkholderia glad

[doa]

การพัฒนาชุดตรวจสอบแบบ Lateral flow test strip เพื่อตรวจสอบแบคทีเรีย Burkholderia gladioli pv. gladioli
ณัฎฐิมา โฆษิตเจริญกุล, ทิพวรรณ กันหาญาติ, ทัศนาพร ทัศคร และรุ่งนภา ทองเคร็ง
กลุ่มวิจัยโรคพืช สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช

          ชุดตรวจสอบ Lateral flow test strip ถูกพัฒนาเพื่อตรวจสอบแบคทีเรีย Burkholderia gladioli pv. gladioli ในกล้วยไม้ โดยอาศัยหลักการทางเซรุ่มวิทยา (serology) และ lateral flow test บนแผ่นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน (Nitrocellulose membrane ; NCM) โดยการเตรียมและทดสอบคุณภาพ IgG ของแอนติซีรั่มของแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli ด้วยวิธี Dot immunobinding assay (DIBA) การเตรียม Gold conjugated IgG โดยนำอนุภาคทอง (colloidal gold) มาเชื่อมต่อ (conjugate) กับ IgG ของแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli และเตรียม conjugated release pad (CRP) โดยใช้ปริมาณ 100 - 120 ไมโครลิตร/15 – 18 เซนติเมตร (6.6 ไมโครลิตร/เซนติเมตร) ผลการทดสอบชนิดของ membrane ที่เหมาะสมในการทำชุดตรวจสอบพบว่า membrane S&S AE 99 และ membrane S&S AE 100 ให้ผลการทดสอบในการทำ test line ได้ดีมากและดี ตามลำดับ ทำชุดตรวจสอบ Lateral flow test strip โดยทำเส้น control line ด้วย GAR (Goat anti rabbit เข้มข้นอัตรา 1:3) และ test line ด้วย IgG ของ แบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli ปริมาณ 40 ไมโครลิตร/2.5 X 18 เซนติเมตร ( 2.2 ไมโครลิตร/เซนติเมตร) บนรูแผ่น membrane S&S AE 99 เมื่อประกอบเป็นชุดตรวจสอบแล้ว ทำการทดสอบกับสารแขวนลอยแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli ความเข้มข้น 10(8) หน่วยโคโลนีต่อมิลลิลิตร พบว่า ชุดตวจสอบ Lateral flow test strip สามารถตรวจสอบแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli ได้อย่างรวดเร็ว โดยเส้น control line และ test line ปรากฏสี ในเวลาประมาณ 5 นาที จากการทดสอบประสิทธิภาพของความไวในการตรวจสอบแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli พบว่า สามารถตรวจพบแบคทีเรีย B. gladioli pv. gladioli ได้ในปริมาณต่ำสุดที่ 104 หน่วยโคโลนีต่อมิลลิลิตร