ปฏิกิริยาพีซีอาร์ในการตรวจเชื้อ Acidovorax avenae subsp. cattleyae สาเหตุโรคใบจุด

[doa]

ปฏิกิริยาพีซีอาร์ในการตรวจเชื้อ Acidovorax avenae subsp. cattleyae สาเหตุโรคใบจุดแบคทีเรียกล้วยไม้
ปิยรัตน์ ธรรมกิจวัฒน์, วงศ์ บุญสืบสกุล และขนิษฐา วงศ์วัฒนารัตน์
กลุ่มวิจัยโรคพืช สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช และสำนักวิจัยพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ

          ทดสอบปฏิกิริยาพีซีอาร์ในการตรวจเชื้อแบคทีเรีย Acidovorax avenae subsp. cattleyae สาเหตุโรคใบจุดแบคทีเรียกล้วยไม้ ด้วยไพรเมอร์จำเพาะต่อแบคทีเรีย A. avenae จำนวน 6 คู่ ได้แก่ RST49/RST51, BX-L1F/BX-S-R2, AacF2/AacR2, AacF3/AacR2, WFB1/WFB2, Oaf1/Oar1 และ Oaf1/Oar2 พบว่า คู่ไพรเมอร์ที่สามารถสังเคราะห์แถบดีเอ็นเอในการตรวจเชื้อได้คือ WFB1/WFB2 ขนาดแถบดีเอ็นเอ 350 bp ไพรเมอร์ Oaf1/Oar1 ได้แถบดีเอ็นเอขนาด 550 bp และคู่ไพรเมอร์ Oaf1/Oar2 ได้แถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 150 bp ทดสอบความจำเพาะต่อแบคทีเรียสาเหตุโรคกล้วยไม้ชนิดอื่นพบว่า ทั้ง 3 คู่ไพรเมอร์สามารถสังเคราะห์แถบดีเอ็นเอจากแบคทีเรีย Erwinia chrysanthemi และ Burkholderia gladioli แต่ไม่สังเคราะห์แถบดีเอ็นเอจากแบคทีเรียสกุล Bacillus หรือแบคทีเรียซาโปรไฟท์อื่นที่แยกจากกล้วยไม้ ปฏิกิริยาความไวในการตรวจเชื้อด้วยคู่ไพรเมอร์ Oaf1/Oar1 สามารถตรวจเชื้อได้ที่ความเข้มข้นดีเอ็นเอต่ำสุด 10 พิโคโมล และตรวจในระดับเซลล์แบคทีเรียได้ต่ำสุดที่ 105 cfu/ml ทดสอบการตรวจเชื้อจากตัวอย่างพืชที่แสดงอาการโรคพบว่า ปฏิกิริยาพีซีอาร์ไม่สามารถสังเคราะห์แถบดีเอ็นเอได้